小鼠胚胎细胞 (NIH/3T3)
细胞介绍与原始的随机交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一样,NIH/3T3,是从MH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触抑制的连续细胞株。为了培育在形态学 特征上更适合于进行转化分析的亚株,建立的MH/3T3细胞株又进行了五轮以上 亚克隆。这株细胞对DNA转化及转染研究十分有用。检测表明肢骨发育畸形病 毒(鼠痘)阴性。细胞特性1)来源:胚胎2)形态:成纤维细胞3)含量:>lxl06 个/mL4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后, 可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐 使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长 状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细胞用途:仅供科研使用。细胞培养步骤1)培养基及培养冻存条件准备:1. 准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),北美胎牛血清,15%, 1% PS。2. 培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱 湿度为70%-80%。3.冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。2)细胞处理:1.复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻,离 心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去 上清液,补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中 培养,补加培养基至6ml。2.细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。力口 lm丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37°C培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部 分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2ml完全培养基 终止消化。轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加l-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。3.细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,细 胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混匀,按每lml的数量分配到冻存管中,注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液 氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。注意事项:收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立 即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注 意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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