非洲绿猴SV40转化的肾细胞
(C0S-7)细胞用途:仅供科研使用。本公司的细胞培养操作规程,供参考1)培养基及培养冻存条件准备:1.准备 DMEM 培养基(DMEM,GIBCO,货号 11965-092),90%;胎牛血清,10%。2. 培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37°C,培养箱湿度为 70%-80%。3.冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。2)细胞处理:复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入lmL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。细胞介绍此细胞株源自CV-1细胞株,经带有编码野生型T抗原的起始失活突变的SV40转染得到。细胞特性1)来源:非洲绿猴肾2)形态:成纤维细胞,贴壁生长3)含量:>lxl06 个/mL4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装细胞接受后的处理:1.收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。2.请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇3.弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。4.如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5.接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37°C培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入lmL培养液后吹匀。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行,最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每lml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。注意事项:收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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