液相色谱常用柱前衍生化

运用液相色谱最多的是紫外检测器，为了使一些没有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外检测器检测，往往要经过衍生化反响在这些化合物的分子中引进有强紫外吸收的基团。这些衍生物可被紫外检测器检测。
大多数紫外衍生反响来自经典的广度剖析和有机定量剖析，新的衍生化反响和衍生试剂随液相色谱的开展而开展，这些反响的原理都来自有机组成，所以就要求操作者对有机组成有所了解。可是，因为柱前衍生化是为色谱剖析预备样品，需求衍生处理的样品的含量水平缓所参与的衍生化反响进程与常量有机组成反响比较有着明显的不同，而是类似于近年来开展的微量有机组成，紫外衍生化反响要求挑选反响产率高、重复性好的反响。过量试剂和试剂中的杂质如果会干扰下一步的色谱别离和检测，则在色谱进样前要进行纯化别离。还要留意反响介质对紫外吸收的影响。下面别离介绍一些常用的反响。
(1)苯甲酰化反响 苯甲酰氯及其衍生物一对硝基苯甲酰氯，3，5-二硝基苯甲酰氯和对甲氧摹苯甲酰氯都能够同胺、醇和酚类化合物反响，生成强紫外吸收的苯甲酸酯类衍生物，过量试剂能够经过水解除掉，反响产品可用有机溶剂提取后直接进样。
(2) 2，4-二硝基氟代苯 (DNFB) 的反响 DNFB与醇的反响产率很低，但可与大多数伯胺、仲胺和氨基酸反响，生成强紫外吸收的苯胺类衍生物。
(3) 苯基异硫氰酸酯 (PITC) 的反响 PITC可与氨基酸反响，生成苯基己内酰硫脲衍生物PTH-氨基酸。
苯基异氰酸酯与醇类反响生成苯基甲酸酯。
(4) 苯基磺酰氯的反响 苯基磺酰氯可与伯胺和仲胺反响。
甲苯磺酰氯可与多氨基化合物反响，不仅能进步其检测是敏度，还可改变HPLC的别离度。
(5) 有机酸的酯化反响 有机酸很容易与酰溴基反响生成酯，常用的酰溴基试剂有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰演、对溴基苯甲酰溴和对硝基苯甲酰溴等。酯化反响在极性溶剂(如乙腈、丙酮或四氢呋喃)中进行，有时需加催化剂，如冠醚加钾离子、三乙胺或N-二异丙基胺等。
(6) 羰基化合物的反响 醛类和酮类中的羰基可与2，4-二硝基苯肼 (DNPH) 反响， 生成苯腙衍生物，反响在弱酸条件下进行。