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一文读懂免疫测定：原理与用途

免疫测定是一种生物分析方法，利用抗原和抗体反应检测给定生物样本中特定生物分子（从小分子到大分子）的存在和浓度。   　　抗体是生物体针对病毒、毒素、细菌等外来物质产生的蛋白质，具有抗原结合位点，可以特异性地与分析物与抗原结合。<o:p></o:p>   　　免疫测定包括将样品与试剂（包含与可检测标记物偶联的特定抗体和在竞争性测定中包含标记的分析物）混合和孵育。样品中存在的目标分析物与试剂中的标记分析物竞争与抗体结合，形成免疫复合物。未结合的分析物和标记的分析物保持游离。<o:p></o:p>   　　然后使用诸如固相吸附和洗涤之类的技术将结合的（免疫复合物）和未结合的部分分离。通过测量结合部分或游离部分中标记物的活性来确定分析物的浓度。将测得的信号与使用已知浓度分析物生成的标准曲线进行比较，从而量化样品中目标分析物的浓度。   <img src="/images/upload/Image/抗原抗体相互作用.png" alt="免疫测定原理" width="500" height="254" /><o:p></o:p>   　　在本文中酶联生物将介绍免疫测定类型、工作原理及应用<o:p></o:p>   <h3>　　免疫测定类型<o:p></o:p></h3>   　　以下是实验室中用于研究不同生物分子的不同类型的免疫测定方法：<o:p></o:p>   　　酶联免疫吸附试验(ELISA)：一种酶联免疫吸附试验(EIA)，在生物化学和免疫学实验室中进行。在这种试验中，抗原或捕获抗体被固定在微孔板表面，然后与靶抗原特异性抗体一起孵育。<o:p></o:p>   　　然后使用各种检测方法（例如化学发光、比色、显色和荧光测定）对抗原-抗体复合物进行可视化。<o:p></o:p>   　　由于酶标记抗体的参与，复合物的可视化成为可能。ELISA测定中广泛使用的结合物包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。它们与合适的底物相互作用，引发产生可测量信号的反应。<o:p></o:p>   　　实验室中使用的ELISA检测方法包括夹心ELISA、竞争性ELISA、直接ELISA和间接ELISA。由于ELISA具有高灵敏度和高特异性，因此广泛应用于生物医学应用，例如药物和抗体的高通量筛选。<o:p></o:p>  <img src="/images/upload/Image/酶联免疫测定.png" alt="酶联免疫吸附测定" width="500" height="200" /> 　　放射免疫分析(RIA)：这是一种高通量技术，用于实验室量化药物、激素和病毒抗原。它使用放射性同位素或放射性同位素标记抗体，以识别目标分析物或特定抗原。在这种方法中，未标记抗原与放射性标记抗原竞争与特定抗体结合。游离放射性标记抗原的水平反映了混合物中未标记抗原的浓度。<o:p></o:p>   　　化学发光免疫分析(CLIA)：这是一种实验室用于检测各种样品中的蛋白质、肽和激素的生化技术。在这种分析中，酶将底物转化为发光而不是产生特定颜色的反应产物。发光是指物质从激发态转变为基态时发出的光。<o:p></o:p>   　　荧光免疫测定：这是一种免疫测定方法，使用荧光分子（如罗丹明B和荧光素）来检测一系列生物分子。荧光标记抗体与抗原结合，产生可测量的荧光强度，用于确定目标分析物的量。<o:p></o:p>   　　计数免疫测定：在这种免疫测定中，颗粒珠上覆盖有针对目标抗原的特异性抗体。然后，将其与样品一起孵育，从而形成抗原抗体复合物。使用细胞计数器对未结合的珠子进行计数，从而得出目标抗原的浓度。<o:p></o:p>   <h3>　　免疫测定的工作原理<o:p></o:p></h3>   　　免疫测定的工作原理是抗原-抗体相互作用。抗体对激素、核蛋白和肽等分析物具有高度特异性。使用纯试剂时，会形成抗原-抗体复合物，从而成功检测分析物。颜色变化表示目标分子的存在，颜色强度代表测试溶液中分析物的量。<o:p></o:p>   　　如今，已开发出多种免疫测定方法，例如ELISA、化学发光和荧光测定，用于不同的目的，但它们都有三个共同组成部分：<o:p></o:p>   <ul> <li>　　目标分析物：您想要使用免疫测定法检测的感兴趣的抗原。<o:p></o:p></li> <li> </li> <li>　　抗体：这些是针对目标抗原具有高结合亲和力的蛋白质。<o:p></o:p></li> <li> </li> <li>　　检测标记：一种化学化合物，当其附着于抗体或抗原上时，在抗原抗体反应后产生可测量的信号。其例子包括荧光素、HRP和罗丹明B。<o:p></o:p></li> </ul>   <h3>　　免疫测定应用<o:p></o:p></h3>   　　免疫测定测试可广泛应用于各种应用，包括医学诊断、环境测试和食品安全。<o:p></o:p>   　　它们在疾病诊断中发挥着重要作用。可用于检测患者血液或其他体液中是否存在疾病特异性抗原或抗体，从而帮助医疗保健提供者诊断和监测各种疾病，包括感染、自身免疫性疾病和癌症。例如，HIV检测是一种免疫测定，用于检测人体血液中是否存在HIV抗体，表明他们已感染该病毒。<o:p></o:p>   　　它们经常用于环境检测。帮助检测水、空气和土壤样本中是否存在污染物、毒素和其他污染物。这对于监测环境安全和保护公众健康非常重要。例如，这些检测可用于检测水样中是否存在铅和汞等重金属，以确保它们符合安全标准。<o:p></o:p>   　　它们在食品行业中至关重要，可以检测食品中是否存在沙门氏菌和大肠杆菌等食源性病原体。这对于确保食品供应安全和防止食物中毒爆发至关重要。此外，它们还可用于检测食品中是否存在花生和牛奶等过敏原，以帮助过敏人群避免潜在的危险情况。<o:p></o:p>   　　了解免疫测定的原理及其多样化的应用，能使科研人员根据特定实验需求（例如目标分析物、灵敏度要求、样品类型和资源）选择最合适的测定方法，最终提高实验结果的可靠性和准确性。<o:p></o:p>

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