要做好以下几点,方可使细胞培养顺利

近期有客户咨询胎牛血清细胞培养中黑点如何防止生成？对此我司经过详细分解，得出以下结论，为防止客户由于操作方面而使黑点生成的办法。对此一定要做好以下几点。方可使细胞培养顺利。

（1） 尽可能地减少血清冻融次数。

（2） 培养基无需 37℃水浴。

（3） 培养基保持zuiPH 值 7.0- 7.2。

（4） 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

（5） 掌握细胞传代的zui时机，细胞切勿生长过老。

1、化冻 将血清从-20 度冰箱中取出，室温（或浸于自来水中）化冻（约需要 30 分钟至 2 小时，也可放于 4 度冰箱化冻过夜；化冻后若不马上灭活，可以放入 4 度冰箱中暂时保存）

2、灭活

（1）放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个空的血清瓶，内装 100ml 自来水，插入一根温度 计，温度监控以此为准）

（2）当温度计显示 56 度时，停止加热，改为间断加热，维持 56 度（±0.5 度）30 分钟（±3 分钟； 若不小心使温度上升超过 56 度，则：若仍未超过 60 度，且时间很短，比如不超过 5 分钟，则仍可使 用；若超过 60 度，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于一些普通细胞的培养）

（3）取出，自然冷却至室温（约需 1-3 小时） ，可分装或-20 度继续冻存。

 3、分装

（1）转入无菌间，在超净台内将血清分装入 10ml 离心管中（注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀； 用吸液管或吹大管吹出血清时要注意：不要吹出气泡（血清很粘稠，很容易产生气泡；如果产生气泡， 则在酒精灯火焰上过一下） ）

（2）放入-20 度冰箱冻存

（3）全部操作约需要 4-6 小时