实验条件
elisa试剂盒白介素类检测抗体多用间接型elisa,以纯化抗原包被载体,经4℃过夜,以无关蛋白封闭至少2小时以上,加入待测样品,室温孵育1小时,洗涤干净后加酶标抗体,再经室温孵育、洗涤后,以底物显色,显色到一定程度终止反应,在酶标仪上读结果或以肉眼判断。
固相载体:
可作为固相载体的物质很多,如:纤维素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交联葡聚糖、玻璃、硅橡胶、琼脂糖凝胶等。可以各种形式出现;试管、微量反应板凹孔、小珠.....常用的是聚苯乙烯制品,其吸附性好,固相包被的机制一般不外乎物理吸附和共价交联,类 型:
elisa具体方法的类型繁多,试剂的标准化问题还未zui后解决,温育的时间、温度、洗涤液的种类及洗涤次数等都是影响测定的因素。但参考以上基本过程,elisa试剂盒无论怎样变化,均离不开抗原-抗体反应、酶标抗体的免疫学反应及酶催化作用。
特 点:
1、敏感性高,可检出浓度在ug~mg/ml水平;
2、特异性强;
3、重复性好;
4、快速、简便、廉价。
封闭:
以无关蛋白占据载体上未被包被的空隙,常用的封闭液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待测样品:
稀释度要合适,浓度太大会发生非特异性吸附造成假阳性,过分稀释会影响抗原-抗体之间的免疫学反应。选择zui适稀释度,在实验体系中取光密度在1.0左右的稀释度为宜。
酶结合物:
elisa试剂盒使用高质量的酶结合物是elisa成功的关键。
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