细胞的型态鉴定与核型分析

(一)形态学鉴定

1．光学显微镜检查

(1) 培养瓶(皿)或培养板直接置于倒置显微镜下观察，上皮细胞呈多边形，边界清晰，大小规则，核呈圆形，核质比例小，细胞间排列整齐，为单层培养物，无重叠生长，是正常上皮组织来源；

成纤维细胞呈长梭形，核小而圆，细胞排列规则、整齐，为单层培养物，无重叠生长，是正常间质组织来源。肿瘤组织来源的贴壁细胞，其单层培养物呈多层重叠生长。

(2) 细胞染色检查：将无菌小玻片(O．5cm×2cm)于细胞传代接种前放人培养瓶皿内，接种细胞悬液后培养，在玻片上制备培养的单层细胞，然后将载有细胞的玻片取出，用磷酸盐缓冲液(phosphate-buffeer saline，PBS)轻轻漂洗后，将玻片放在普通玻片上，空气中自然干燥。

经PBS／甲醇(1：1)固定液同定15min，弃固定液，加吉姆萨(Giemsa)染色液染色10～15min，用清水漂洗干净，置于空气中干燥，用二甲苯透明，用光学树脂胶片封片后观察。上皮细胞和成纤维细胞的形态与直接镜检相同，细胞核染成紫红或蓝紫色，胞质染成粉红色。

2．电子显微镜观察通常用透射电镜检查细胞的超微结构。取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶消化，加培养液悬浮消化的细胞，用1000r／min离心5min。

收集离心管底部细胞，经戊二醛固定，包埋，超薄切片；也可采用细胞原位包埋的方法，将细胞培养于电镜用特殊膜上，进行固定，包埋，该法不破坏细胞问排列关系。在电镜下可见到上皮细胞的张力原纤维和桥粒等，腺细胞可见胞质中的分泌颗粒，这对确定培养细胞系组织来源有重要意义。

(二)细胞核型分析

细胞染色体核型分析能简易、有效地确定细胞种来源和鉴定正常或恶性的性质，以及检查细胞有无交叉污染等。细胞染色体核型分析包括制备中期细胞分裂象样本，将分散的单个染色体进行计数和排列分组分析。

1．制备细胞分裂样本取对数生长期的细胞悬液，加入1×1 0-5 mol／L秋水仙素(终浓度为1×10-7mol／L)到养液中，处理6h后，轻轻吸出培养液，加0．25％胰蛋白酶消化细胞或手振摇培养瓶使细胞脱落，收集中期分裂象细胞，37℃静置20min后加入冰醋酸一甲醇(1：1)1ml，固定细胞1～20min，再次以1000r／min离心：10min，去上清液，加入新固定液，吹打混匀，第3次经1000r／mln离心10min，收集分裂象细胞。

2．制备染色体玻片将沉集的细胞加入O．2ml醋酸甲醇分散细胞，取一滴细胞悬液加到冰冷的玻片上，同时用口吹散细胞液滴，使细胞均匀分散于玻片上。同时可多制备几张染色体玻片，待干燥后染色、镜检。

3．染色体计数及核型分析取染色体玻片经吉萨姆染色后镜检。在显微镜下可观察到多个中期分裂象细胞染色体，计数50～100个细胞染色体数目，并计数出细胞染色体的分布，细胞群体中分布zui多的染色体数目是染色体数。人正常细胞有46条染色体，为23对二倍体。

染色体分组排列，每组染色体无增加或减少，无异常染色体。小鼠染色体为40条，不仅数目与人染色体不同，而且以顶端着丝点为主。人的染色体则为中央着丝点，数目与着丝点位置可作为细胞系是人或鼠来源的依据。