细胞培养出现问题了应该怎么办

细胞无法在培养器皿上贴壁生长

1. 细胞胰酶消化过度：缩短胰酶消化时刻或削减胰酶用量。

2. 支原体污染：阻隔细胞，查看是不是传染支原体；清洁通风厨和培育箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢掉。

3. 培育基中无附着因子：如果运用的是无血清配方，应保证富含附着因子或许运用经过包被的培育板。

一、细胞成长缓慢

1. 培育基或血清改变，比较不同培育基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有无区别；经过成长试验对比新老批次血清有无区别；增大细胞初始接种密度；使细胞逐渐习惯新的培育基。

2. 必需成长推进成分（如L-谷氨酰胺或成长因子）耗竭、缺乏或分解：去掉原培育基，参加新鲜培育基；向培育基中增加成长推进成分（如L-谷氨酰胺）。

3. 轻度细菌或真菌污染：在不增加抗生素的条件下进行培育，如细胞被污染，灭菌处理后丢掉。

4. 时刻存储不妥：血清应于-5℃至-20℃下贮存；培育基应于2℃~8℃下避光贮存；尽量削减血清和培育基见光时刻。

5. 细胞初始接种密度低：增大活细胞接种密度。

6. 细胞变老、老化：将老化细胞丢掉，取用代数较少的细胞。

7. 支原体污染：阻隔细胞，查看是不是传染支原体；清洁通风厨和培育箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢掉。

二、培育基pH值改变敏捷

1. 培育箱CO2分压设置过错：依据培育基中NaHCO3的浓度增大或下降培育箱CO2的分压，NaHCO3浓度为2.0-3.7g/L时，应相应地运用5%-10%的CO2分压。

2. 细胞培育瓶瓶盖过紧：将瓶盖旋松1/4圈。

3. 碳酸氢盐缓存体系缓冲才能缺乏：参加HEPES缓冲液，使其终浓度为10-25mM。

4. 培育基中盐含量不正确：CO2平衡环境中运用以Earle平衡盐为根底的培育基，大气条件下运用以Hanks平衡盐为根底的培育基。

5. 细菌、酵母或真菌污染：将细胞和培育基灭菌处理后丢掉。

三、细胞凋亡

1. 培育箱中无CO2：监测培育箱中CO2运用速度以便断定及时更换气瓶；常常查看管路衔接处是不是漏气；不要频频敞开培育箱门。

2. 培育箱内温度有动摇：监测培育箱内温度，及时校对。

3. 运用抗生素到达毒性浓度：削减抗生素的用量；运用无血清培育基时，抗生素浓度应下降至1/10。

4. 细胞复苏或冻存时遭到损害：取用新的细胞。

5. 培育基的渗透压不合适：查看彻底培育基的渗透压。大多数哺乳动物细胞可耐受260~350mOsm/kg的渗透压，参加某些试剂和药物后会影响培育基的渗透压；昆虫细胞培育基的渗透压（340~380mOsm/kg）要高于哺乳动物细胞。

6. 培育基中毒性代谢商品积蓄：去掉原培育基，换用新鲜培育基。

四、悬浮细胞集成团

1. 存在钙离子和镁离子：用不含钙离子和镁离子的平衡盐溶液清洁细胞，轻轻吹打细胞，使其构成单细胞悬液。

2. 支原体污染：阻隔细胞，查看是不是传染支原体；清洁通风厨和培育箱，如细胞被污染，灭菌处理后丢掉。

3. 蛋白水解酶消化过度导致细胞裂解、DNA开释：用0.001%DNA酶I处理细胞；用PBS冲刷后再接种到新培育基中。

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