温育是ELISA试剂盒测定中影响测定胜败最为关键的一个要素。ELISA实验作为一种固相免疫测定,抗原抗体的联络反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原彻底联络,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶联络物后。抗原抗体反应的完结需要有一定的温度和时间,这一保温进程称为温育(incubation),也被称之为孵育。
这是一个逐渐平衡的进程,因而需经涣散才华到达反应的结尾。在这今后参加的酶符号抗体与固相抗原的联络也相同如此。
ELISA试剂盒温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体联络的适宜温度。
实验标明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达高峰。为加快反应,可前进反应的温度,ELISA试剂盒有些实验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中放置一晚上,以构成最多的堆积。但因所需时间太长,在ELISA中一般不予选用。
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