ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后,ELISA试剂盒加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色:ELISA试剂盒颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。ELSIA操作步骤复杂,影响反应因素较多,特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致.
因此在定量测定中, ELISA试剂盒每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
测定大分子量物质的夹心法ELISA试剂盒,标准曲线的范围一般较宽,曲线最高点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,以检测物的浓度为横坐标,ELISA试剂盒以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。
ELISA试剂盒酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用。
有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。ELISA试剂盒底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
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