大鼠肺泡巨噬细胞
(NR8383)细胞介绍NR8383(正常大鼠,1983年)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后,不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞,并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性,吞噬酵母多糖和铜绿,非特异性脂酶活性,Fc受体,氧化降解;分泌IL-l,TGF-(3和IL-6,可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素,分泌TGF-0前体。在博莱霉素刺激下,TGF-(3mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10钠克/毫升的LPS水平抑制增生达50%。即使达到0.001毫克/毫升的水平,LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源,可以用于体外研究巨响细胞相关活性。细胞特性1)来源:肺;巨噬细胞2)形态:巨噬细胞,半悬浮生长3)含量:>lxl06 个/mL4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装细胞接受后的处理:1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。4) 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。细胞用途:仅供科研使用。本公司的细胞培养操作规程,供参考一.培养基及培养冻存条件准备:1.准备F-12K培养基(F-12K,GIBCO,货号21127-022),90%;优质胎牛血清,10%。2.培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37°C,培养箱湿度为 70%-80%。3.冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。二.细胞处理:复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入lmL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养液后吹句,将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。(该细胞建议使用第一种方法,将所有细胞收集起来)方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM,常温条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,吹打均匀后,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。注意事项:收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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