小鼠畸胎瘤细胞 (P19)
细胞介绍加拿大渥太华大学的Me Burney等在1982年从雄性小鼠畸胎瘤中分离得到的, 是一种能够在体外培养的多能干细胞,P19细胞团经RA诱导可分化成神经元、 胶质细胞和纤维母细胞;而经二甲基亚砜(DM SO)诱导则分化成心肌、骨骼肌和 平滑肌细胞;在P19细胞向神经元分化的过程中,神经发育相关基因的表达模式 基本模拟了正常小鼠神经发育过程,因此,P19目前被用作一个研究神经发育的 体外模型。P19细胞作为研究神经分化机制的模型,显著区别于其他细胞系的四 大特点是:①它具有正常小鼠的二倍体核型,细胞分裂快,可在体外迅速大量扩 增,多次传代也不丧失其分化能力。②P19细胞具有多种分化潜力,不同诱导条 件下可定向分化成不同类型的细胞,种植到孕鼠囊胚中能分化成多种类型细胞。 ③根据P19细胞诱导分化分阶段进行的特点,能将神经分化的早期机制与参与 突起延伸的机制分开研究。④该细胞易于转染,且转染后仍能正常分化,适于进 行细胞基因研究。通过转染正常或突变的目的基因,增强或抑制它们的表达水平 可用于研究这些基因在神经分化中的作用。另外,利用反义RNA阻断内源蛋白 的表达,可用来观察这些蛋白在神经分化中的作用。(references:1.张金平等.全反式维甲酸体外诱导P19细胞向心肌方向分化.[」]中国组织化学与 细胞化学杂志.2012.12.梅宇钦等.建立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经分化模型.浙江大学学报(医 学版)2012.04)细胞特性1)来源:胚胎;崎胎癌2)形态:上皮细胞样3)含量:>lxl06 个/mL4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细 胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细胞用途:仅供科研使用。细胞培养步骤一.培养基及培养冻存条件准备:1.准备MEMa培养基(MEMa+培养基(GIBCO,货号11900024,添加NaHC〇31.5g八, 肌醇43.2mg八,叶酸8.82mg八,0-巯基乙醇7.8mg八),90%; BCS,7.5%;胎 牛血清,2.5%。2. 培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱 湿度为70%-80%。3.冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。二.细胞处理:复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻,加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补 加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检 查细胞密度。细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2■加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37C培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部 分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分 钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4.将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者 瓶中。对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL 培养液后吹匀,将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的 新皿中或者瓶中。方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细 胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃 去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后 加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞 收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加 入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻 存。注意事项:收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立 即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注 意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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