人非小细胞肺癌细胞
(HCC827)注意事项:1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。细胞介绍这株细胞建于 1994 年三月。这株肺腺癌在 EGFR 酪氨酸激酶区域有一个获得性突变(E746-A750 缺失)。患者在 25 岁到 26 岁时每个月抽 1 包烟。在诊断前 12 年不再抽烟。细胞特性1. 来源:肺腺癌2. 形态 :上皮细胞样3. 含量:>1x10 6 个/mL4. 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5. 规格:T25 瓶或者 1mL 冻存管包装运输和保存:使用含有优质胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在 1000RPM,常温条件下,离心 5min 后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至 10cm 培养皿或者 T25 培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细胞用途:仅供科研使用。细胞培养步骤一. 培养基 及 培养 冻存 条件准备:1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO 3 1.5g/L,D-葡萄糖 2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37 摄氏度,培养箱湿度为 70%-80%。3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。二. 细胞 处理 :1) 复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约 1ml 含血清的培养基后加入冻存管中,再添加 10%DMSO 后进行冻存。
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