BL21 Electroporation-Competent Cell说明书
产品货号: ML-G27020
保存条件: -80℃
产品规格: 10×50μl 50×50μl
产品介绍
基 因 型
E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)
简 要 说 明
BL21是最早开发的用于原核表达的菌株,BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达,不含T7 RNA聚合酶,所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如:pET系列);但含有大肠杆菌RNA聚合酶,可以用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如:pGEX,pMAL质粒)。MLBio High5TM系列 BL21电击感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率达1010cfu/μg。。
操 作 说 明
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的BL21电击感受态细胞插入冰中5 分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19;
B. 对于连接产物,大部分公司的T4连接酶反应体系或50度反应重组体系可与DB3.1电击感受态混合后电击转化,无需进行DNA纯化,但DNA浓度不能过高,DNA浓度不超过100 ng/μl,体积不超过5 μl/50 μl感受态。
C. 对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬,然后与DB3.1电击感受态混合进行电击转化。
3.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。
4.启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。
5.2分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基(室温),用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等),向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃,225 rpm复苏60分钟。
6.5000 rpm离心一分钟收菌,重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。
注 意 事 项
1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
3.当DNA不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5.若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
6.对于连接产物转化,部分公司的连接体系或重组体系(例如:Thermo,NEB公司的T4 连接酶系统,NEB,天根的50度反应重组系统)可以直接与DB3.1电击感受态混合后电击转化,无需纯化,但DNA浓度不能过高,最好不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
7.混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
产品标签
用户评论(共6条评论)
- Tuner(DE3)感受态细胞
- BL21 Star(DE3)感受态细胞
- BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受态细胞
- C43(DE3) pLysS感受态细胞
- BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞
- Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞
- Tuner(DE3)pLysS感受态细胞
- TB1感受态细胞
- Rosetta(DE3) 感受态细胞
- BL21(AI)感受态细胞
- OverExpress C43(DE3)电击感受态细胞
- Rosetta-gami 2(DE3)
- Rosetta-gami B(DE3)
- ER2566 感受态细胞
- Rosetta 2(DE3)感受态细胞
- BL21(DE3) 感受态细胞
- M15(pREP4) 感受态细胞
- OrigamiB(DE3)感受态细胞
- ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞
- OverExpress C43(DE3)感受态细胞
- BL21感受态细胞
- BL21(DE3)pLysS感受态细胞
- OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞
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