Y1HGold Chemically Competent Cell说明书产品货号: ML-G2046
保存条件: -80℃
产品规格: 10×100μl 50×100μl
产品介绍基 因 型MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met–, MEL1简 要 说 明Y1HGold菌株是Clontech公司开发的GAL4-AbA酵母单杂系统用菌株,MATα型,可直接转化质粒进行筛库试验。Transformation marker为: ura3,leu2;报告基因为:AbAr。Y1HGold -GAL4-AbA酵母单杂系统需要两种质粒配套使用:pAbAi和PGADT7。质粒pAbAi的筛选标志为URA,用于表达 pBait-AbAi construct (1~3个bait DNA序列重复串联后克隆到pAbAi中);质粒PGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4-AbA酵母单杂系统原理:Aureobasidin A (AbA)是一种环酯肽抗生素,在低浓度(0.1-0.2ug/ml) 下即可对酵母产生毒性。基因组中整合了pBait-AbAi 的酵母菌株(Bait-Reporter Yeast Strains),当猎物蛋白(Prey)结合到诱饵序列(Bait DNA)上,GAL4 AD就会激活AbAr 的表达,从而能够在含有抗生素AbA的培养基上生长。AbAr与营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点,可以降低酵母单杂假阳性发生的概率。MLBio High5TM系列Y1HGold感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,经pAbAi质粒检测转化效率>103cfu/μg DNA 。操 作 说 明1.取pBait-AbAi质粒5ug,BstBI 或 BbsI酶切1小时,回收。2.取100 μl冰上融化的MLBio Y1HGold感受态细胞,依次加入预冷的线性pBait-AbAi质粒1-5ug(体积不高于15ul),Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴,重复一次)10 ul ,PEG/LiAc 500ul并吸打几次混匀,30度水浴30 分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。3.将管放42度水浴15min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。4.5000 rpm离心40s弃上清,ddH2O 400ul重悬,离心30s弃上清。5.ddH2O 50ul重悬,涂SD/-Ura平板,29℃培养72h。6.挑取5-10个克隆,用PCR方法确定pBait-AbAi整合到Y1HGold基因组中,PCR阳性菌株在SD/-Ura平板划线,29℃培养72h,4℃保存,此菌株即是Y1HGold[Bait/AbAi]菌株。Preparation of Media:YPDA (1L):Tryptone 20gyeast extract 10g0.2% adenine 15ml补水到 950ml, 用盐酸调PH到 6.5Agar 20g (for plates only)121度,15分钟高压灭菌,待培养基温度降到55度时,加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml
0.2% adenine(1L)Adenine 2g补水到1L,溶解后高压灭菌或0.22um滤膜过滤除菌注 意 事 项1.MLBio 感受态细胞最好在冰上融化。2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。4.Y1HGold酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。5.菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,Y1HGold的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆。
产品标签
用户评论(共6条评论)
上海酶联生物科技有限公司
Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd.
订购热线:4008-898-798 / 021-54720761
传 真:021-54222852
地址:上海市松江区云凯路66号T2楼1603室
酶联官方手机二维码
微信扫描二维码,参与酶联活动,
劲爆优惠触手可得!
本网站销售的所有产品仅用于工业应用或者科学研究等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。