盲肠结扎穿孔以及电针刺激

　　1. SD大鼠适应性饲养一周

　　2. 水合氯醛麻醉，然后打开腹部，对盲肠用生锈的注射器针头刺穿

　　3. 术后缝合，观察动物状态，并对电针组实验动物进行电针治疗

　　4. 在6h、12h分别处死部分动物取血

肿瘤模型（皮下种植结肠癌/肝癌/肺癌模型）

　　1. 购买4~6周的裸鼠，适应性饲养一周

　　2. 前肢腋下部位附近皮下种植结肠癌细胞，浓度1X107个/100ul

　　3. 注意无菌，然后饲养观察

　　4. 称重和实验观察和记录

　　5. 一般实验需要4周左右

大鼠心梗模型

　　1. 购买4-6周的大鼠，适应性饲养一周

　　2. 进行大鼠冠脉结扎，于末次给药后1h，在戊巴比妥钠腹腔麻醉下仰位固定于手术台，自左侧3-4肋间开胸，暴露心脏，于肺 动脉圆锥及左心房间找出冠脉左前降支,立即结扎冠脉，将心脏送回胸腔，并挤出胸腔内血液和气体，迅速关闭胸腔，开胸时间不超过30s。术后5天连续注射青霉素钠

　　3. 观察开胸后、缝针后、结扎后、关胸后心电图的变化

　　4. 合格后的大鼠在4周及6周后复查心电图

自体静脉移植

　　1. 选新西兰大耳兔，戊巴比妥钠按照体重麻醉

　　2. 切开颈部皮肤，钝性分离皮下组织；选取大小和直径同要移植部位的血管相同的静脉血管，先结扎该静脉的两端

　　3. 剪下该静脉，用灭菌生理盐水冲洗干净，备用

　　4. 将要移植部位的动脉血管，同周围组织分离，两端用动脉夹夹闭，然后剪下，把断端清洗干净；把前面的静脉缝合到该动脉断端。先稍微放开远心端的动脉夹，检查是否有渗血，确认无渗血后，同样 方法检查另外一端

　　5. 分层缝合，在关闭皮肤前，进行严格清洁和抗菌处理，然后缝合皮肤

　　6. 术后两周内静脉注射适量的肝素抗凝，随时观察实验动物的状态，及时处理；根据客户自己确定实验周期，准备动物和实验器材至少需要一周

 

贴剂动物体外实验

　　1. 实验分组及处理

　　2. 用药24h后取下，用温水洗脱

　　3. 分别于1h，24h，48h，72h肉眼观察局部有无红斑和水肿。然后连续用药7d，每天贴敷时间为12h，观察停药1h，24h，48h，72h后局部红斑、水肿情况，以及是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况，记录发生和消退时间

 

皮肤急性毒性试验

　　1. 实验分组及处理

　　2. 用药24h后取下，用温水洗脱

　　3. 分别于1h，24h，48h，72h至第7天，每天观察并记录动物的体重、皮毛光泽、饮食、眼和粘膜的变化，呼吸中枢、神经系统、四肢活动和死亡情况

　　4. 并于7天后处死大鼠，解剖观察其心、肝、肺、肾、卵巢、子宫等脏器有无异常变化，详细记录任何组织或器官出现的体积、颜色、质地的改变

　　5. 主要脏器称重，计算脏器指数

 

皮肤过敏试验

　　1. 实验分组及处理

　　2. 脱毛24h后，取痛经巴布贴贴敷在SD大鼠脱毛区，并以无刺激胶布固定，持续6h，第7天和第14天以同样方法重复一次

　　3. 于末次给痛经巴布贴巴布剂致敏后14d，将痛经巴布贴贴敷于SD大鼠脱毛区，赋形剂贴对照组与阳性对照组方法同上

　　4. 6h后去掉受试药物，即刻观察，并于24h，48h，72h再观察有无过敏反应，按表一记录个时间过敏反应分值，同时注意观察SD大鼠是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身性过敏反应，计算致敏发生率

 

药效学实验

　　1. 实验分组及处理

　　2. 采用戊酸雌二醇+催产素引起大鼠子宫收缩为痛经模型。大鼠灌胃0.8mg/只/天（第1天和第10天），其它时间0.4mg/只/天，连续15天，第15天腹腔注射催产素2u/kg

　　3. 一般行为观察：精神状态、活动度、体重、食量、死亡率等

　　4. 扭体反应发生率观察：注射催产素后观察30min扭体反应发生率

　　5. 疗效观察：各组模型大鼠子宫、卵巢精确称重，计算子宫、卵巢指数

　　6. 观察对模型大鼠血液流变学的影响

 

IBD模型

　　1. 造模前 1d 禁食 24h 不禁水称重后，3%的戊巴比妥腹腔注射麻醉（或乙醚） 5%(W/V)的2，4，6-三硝基苯磺酸 （TNBS） 按 100mg/kg-150mg/kg（约等于TNBS 原液 0.4mL-0.6 mL，相当于 200 g 大鼠 20 mg-30 mg ）

　　2. 分别加入乙醇，体位为头朝下，用聚丙烯管插入肛门上段4cm 注射器注入

　　3. 再倒立1-5min左右，以防药液溢出，每隔10d重复灌肠4次后可制成病鼠模型

　　4. 采血前观察SD大白鼠的情况，记录大鼠外观体征、行为活动、粪便的情况，记录死亡情况，每天称重

MTD实验

　　1. 动物称重并标记

　　2. 计算相应给药体积：按需计算每只动物的给药量，分为高中低3个梯度，并作记录

　　3. 给药操作

　　4. 给药后观察：在给药时记录给药时间。连续观察至少14天，观察一般指标（如动物外观、行为、对刺激的反应、分泌物、排泄物等）、动物死亡情况（死亡时间、濒死前反应等）、动物体重变化。记录所有的死亡情况、出现的症状，以及症状起始的时间、严重程度、持续时间等

 

肾脏缺血再灌注

　　1. 购买200g的SD大鼠，饲养一周，分组

　　2. 根据体重注射相应剂量的水合氯醛，麻醉后进行手术

　　3. 打开腹腔，钝性分离肾动脉，然后用动脉夹夹闭肾脏动脉30-45min，根据实验者的设计执行

　　4. 然后去除动脉夹，肾脏再次流入动脉血，肾脏由紫黑重新变为鲜红色

　　5. 然后根据实验要求取材

 

成年营养性肥胖大鼠模型

　　1. 购买体重200g的雄性SD大鼠

　　2. 方法 :用高脂 高糖饲料喂养成年大鼠四至八周

　　3. 观察大鼠体重及Lee’s指数、腹腔内脂肪重量及脂肪系数、葡萄糖耐量、血脂、血糖及血胰岛素水平 ,并算出胰岛素敏感性指数等

 

转基因小鼠筛选——鼠尾提取基因组DNA方法

　　1. 小鼠分笼后打耳标，剪取小鼠尾尖3mm-5mm左右于1.5mL 离心管中，标记耳标号

　　2. 配置消化液(SSTE)，每管加入消化液0.5mL，蛋白酶K 1-5 μL， 55℃，3-5h,或放置过夜。（最长可放置3天）

　　3. 加1倍体积（0.5mL）PCI(下层液体)，上下颠倒10余次。（PCI可分装出一些现用，以免操作不慎污染）

　　4. 室温15000rpm离心，10min

　　5. 取上清约0.4mL入新管，依次标号，加入异丙醇0.4mL ，4℃，15000rpm离心，5min

　　6. 弃上清，滤纸吸干，加入70%乙醇0.5mL，将管底沉淀弹起，上下颠倒几次，洗涤

　　7. 4℃，15000rpm离心，5-7min

　　8. 弃上清，瞬时离心，用枪吸干剩余液体，后经空气干燥5-10min

　　9. 加入1*TE 60-170μL一般加100μL，振荡30min溶解，于4℃冰箱保存

 

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