人胰羧肽酶B2(CPB2)ELISA试剂盒试验原理：
人胰羧肽酶B2(CPB2)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
自备材料
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70
℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
用户评论(共6条评论)
酶联生物经过不断的实验优化和改进，积累了大量的经验，拥有专业的酶联研发团队。利用专业的酶联免疫技术自主研发的elisa试剂盒，能对血清及其它样本定量检测抗原，定性检测特异性抗体。优质的试剂，先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。
ELISA检测技术服务内容：
1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
以上代测费，凡购买本公司试剂盒，我们免费代测！
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二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。
液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
三、寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；3、联系方式；4、实验后标本是否寄回。
客户须知：
客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
五种常见生化试剂盒的应用方法
生化试剂盒的使用主要是为了检测样品中是否含有某种酶或者是某种维生素等物质，检测的主要目的也是为了确保检验结果的准确性。
酶标仪
1. 酶标仪是一种仪器，其原理是以酶催化底物产生有色产物，通过测定吸光度值来测定物质的含量，酶标仪主要有比色法、比浊法、免疫法和光度法四种。
2. 比色法是检测维生素类物质常用的方法之一，在临床上也被广泛应用，以酶标仪为例，一般都是采用比色法来检测维生素类物质的含量。
3. 免疫法和光度法是用来检测抗体的常用方法，但由于抗体有一定的免疫原性，在临床上并不常用。酶标仪既可以检测抗体也可以检测抗原，其功能比较齐全。
时间分辨荧光检测
时间分辨荧光技术（TRFIA）是一种基于荧光染料标记的荧光检测技术，该技术基于时间分辨荧光显微镜上的荧光染料标记的探针，并在一定时间内激发、发射荧光，通过对样品进行检测，获得被测物质的光吸收曲线，从而判断出样品中被测物质含量。这种检测方法可以用来检测 DNA、蛋白质以及生物大分子等物质。
酶联免疫吸附检测
酶联免疫吸附检测法（ELISA）是应用酶的特异性结合反应进行抗原抗体的标记和检测，是目前最常用的一种定性和定量分析方法，在科研中，酶联免疫吸附检测主要用于肿瘤标志物、药物代谢产物、药物浓度、食品污染物、环境污染物等的测定，具有快速、准确、简便等优点。
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析技术（Chemiluminescence immunoassay, CLIA）是利用鲁米诺-过氧化物酶（RGO）和化学发光底物的化学反应作为信号分子，将待测抗原与标记抗体（或抗原）进行特异性结合反应，并在一定条件下使标记抗体或抗原和反应产物中的化学发光信号放大，从而检测待测标本中的目标分子，化学发光免疫分析技术具有操作简单、灵敏度高、特异性好等优点，广泛应用于临床上疾病的诊断和药物研究中。
流式细胞仪
流式细胞仪是一种可以同时检测多种细胞类型的仪器，也可以检测多种细胞类型，生化试剂盒在科研中的应用主要是用于检测细胞的种类，用于研究细胞的特性以及变化规律，分析和判断细胞之间的联系。
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上海酶联生物科技有限公司经营的生化试剂盒可以通过对生化试剂盒进行不同类型、不同程度的分析，了解不同样本中是否含有某种物质或者某种维生素等，通过对这些物质的分析，我们可以更好地了解不同样本中所含有的成分和变化规律，目前市面上有很多可直接使用的流式细胞仪，通过各种生化试剂盒，而我们可以直接在仪器上进行操作，进行多种类型细胞的检测。
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