BL21 Star(DE3)pLysSChemically Competent Cell说明书
产品货号: ML-G27015
保存条件: -80℃
产品规格: 10×100μl 50×100μl
产品介绍基 因 型
F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (CamR)
简 要 说 明
BL21Star(DE3)pLysS 菌株来源于BL21(DE3),含有 rne131 突变(RNaseE基因),RNaseE 基因的突变降低了內源RNase 的积累,增强菌株细胞内mRNA 的稳定性,从而提高异源蛋白的表达水平。-MLBio
主要适用于T7 启动子表达载体(如 pET系列)的高水平蛋白表达,同时含有大肠杆菌 RNA聚合酶,也可用于非T7 启动子表达载体(pGEX,pMAL等)的蛋白表达。由于 BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高,所以不适合毒性蛋白的表达。-MLBio
BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带pLysS 质粒,具有氯霉素抗性。pLysS 含有表达 T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与 T7 RNA 聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG 诱导的表达。pLysS 质粒含有 p15A 复制起始子,可以和含有 pUC或 pBR322 等复制起始子的质粒兼容。Bio-BL21Star(DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。
操 作 说 明
1.Bio-BL21Star(DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT 或 LB),混匀后37℃, 200 rpm 复苏60 分钟。
4.5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注 意 事 项
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8 分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-10 mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
6.BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有 34µg/ml 氯霉素,以防质粒丢失。
产品标签
用户评论(共6条评论)
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