<p><br />
<u><span style="font-size: medium;"><strong><a href="http://www.mlbio.cn/category-345-b0.html"><span style="color: rgb(255, 0, 0);">NCI-H196人肺癌细胞</span></a></strong></span></u></p>
<p>Catalogue No : C1114</p>
<p>Product Format : a T25 flask</p>
<p>Culture Properties： 贴壁</p>
<p>Complete Growth Medium : 89%1640+10%FBS+1%双抗</p>
<p>Atmosphere : air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%</p>
<p>Application : Cells and cancer research</p>
<p>NOTE : FOR RESEARCH USE ONLY</p>
<p><u><strong>Operation steps for cell culture</strong></u><u><strong>：</strong></u></p>
<p>1. 吸走用于培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；</p>
<p>2. 吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）</p>
<p>3. 加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀； </p>
<p>4. 将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；</p>
<p><strong>传代比例 : </strong>不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。</p>
<p><u><strong>Cell cryopreservation</strong></u><u><strong>：</strong></u></p>
<p>1. 冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）</p>
<p>2. 降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。</p>
<p><u><strong>Tips：</strong></u></p>
<p>1. 细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。加5ml PBS重悬细胞，再900-1000rpm(约150g)离心3min，用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。</p>
<p>2. 细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。</p>
<p>3. 细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（最高不超过20%），也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。</p>
<p>4. 不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min均有可能，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞完全漂浮。客户消化过度导致细胞死亡、漂浮、生长缓慢，不提供免费售后服务。</p>
<p>5. 干冰发货均为两支，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户同时复苏两支均状态不佳，我方不提供免费售后服务。</p>
<p>6. 细胞状态正常时，应尽快冻存细胞保种，冻存后应随机抽取一支检测冻存效果。我方不对客户冻存细胞导致死亡负责，客户冻存细胞死亡不提供免费售后服务。</p>
<p><u><strong>Notice：</strong></u></p>
<p>客户收到细胞有任何疑问请及时致电我们，细胞收到后1周内没有任何电话，或其他形式回访，默认为细胞质量没问题，之后出了任何问题不给予免费售后。细胞免费售后只提供一次，若重发后再次培养死亡不再免费补发，细胞收货时已经死亡或密度不足的除外。</p>
用户评论(共6条评论)
酶联生物经过不断的实验优化和改进，积累了大量的经验，拥有专业的酶联研发团队。利用专业的酶联免疫技术自主研发的elisa试剂盒，能对血清及其它样本定量检测抗原，定性检测特异性抗体。优质的试剂，先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。
ELISA检测技术服务内容：
1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
以上代测费，凡购买本公司试剂盒，我们免费代测！
凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）种类和检测指标（白介素类、激素类）及标本数量（48T/96T）通知公司业务员即可。在接到客户标本当日起，现货产品一周内将检测报告交到客户手中！
欢迎各科研单位在各种项目上与我们公司开展不同层次的密切合作，以双赢求发展，共同进步，为中国检测事业的发展积累经验。
二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。
液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
三、寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；3、联系方式；4、实验后标本是否寄回。
客户须知：
客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
为什么要进行细胞系的STR鉴定
什么是细胞系鉴定？
所谓细胞系鉴定即通过
STR（短串联重复）图谱所建立细胞系的遗传特征。一株细胞系的遗传特征确立后，细胞系可以通过定期的检测，以防止出现细胞系被误认或交叉污染的情况。
为什么要进行细胞系鉴定？
首先进行细胞系
STR鉴定是很重要的。很多生物医药的研究都采用培养细胞来进行，据估计，15-20%的实验室，实验中所使用的细胞已经不是原来的细胞系，或者与其它细胞系发生了交叉污染。显然，细胞系遭到污染、特征鉴别错误，将会极大的威胁着基于这些细胞而发表的论文质量和研究发现的正确性。为此，很多细胞库现在都要对提交来的细胞系进行鉴定，并对细胞系之间的交叉污染进行监测。
什么细胞最容易污染别的细胞？
Hela细胞。五十多年来，Hela细胞系被广泛用于医学和生物学领域的研究，对当代生命科学的发展屡建奇功，是名副其实的生物学研究的亲历践行者。同时很多被广泛研究的细胞系都被Hela细胞淹没，因为她长得快，当你发现自己的一个培养瓶里的细胞突然长得很好，而以后都用它传代做实验的话，十之八九是搞错了。
早在1967年，遗传学家StanleyGartler发现HEp-2和INT407这两种细胞系都是生物学领域研究最多的肿瘤细胞系——Hela细胞。
有哪些细胞曾被
Hela污染？
lnt-407、HEp-2、WISH（人羊膜细胞）、Acc-M（人原发性延腺癌细胞）、Bcap-37
（人乳腺癌细胞）、HAC-84（人肺腺癌克隆）、Hepatoma（人肝癌细胞）、HUL-42（人肺腺癌细胞）、CNE（人鼻咽癌细胞）、SPC-A-1（人肺腺癌细胞）、Tca-8113（人舌鳞癌细胞）、YTMLC（个旧肺鳞癌细胞）等一百余种。
如何进行细胞系鉴定？
细胞系鉴定目前主要基于国际身份认证委员会的标准。依据该标准，可以通过多重荧光
PCR技术，对人源8个STR位点以及1个性别决定位点进行检测。我公司做的STR 鉴定，除以上9个位点之外，将对检测细胞加做12个其它位点信息。
什么时候需细胞系鉴定？
1）当建立或获得一个新的细胞系时；
2）一个涉及到细胞试验项目开始/结束时；
3）在细胞冻存之前，或细胞已连续培养2～3个月时；
4）发表文章或申请课题经费前；
5）细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大时；
6）当实验室使用超过一种细胞系时，所有细胞系应先鉴定以排除交叉污染的可能。
如何提供鉴定样本？
我公司建议客户对每种进行检测的目的细胞复苏好
T25培养瓶寄送活细胞，或者对每种需要进行检测的细胞单独收集在1.5ml离心管中，细胞数目不少于10的6次方个。细胞需要离心沉淀，并且以PBS清洗尽可能去除上清培养基，沉淀进行冰冻（干冰）保存与寄送。（推荐复苏好T25培养瓶常温寄送活细胞，细胞数目不少于10的6次方个）
如何知道细胞系是否发生交叉污染了？
如果存在细胞系之间发生交叉污染，而且鉴定用的细胞可能有两种以上的细胞系时，那么在进行
STR位点检测的时候，多个位点会出现两个以上的峰。峰高值表示该等位基因的信号强度，理论上峰值与样本的DNA浓度有直接的关系。因此，存在交叉污染的混合细胞系中，其中一个位点中某些峰会明显高于其他的峰，其中大峰是属于混合细胞系中那个主要细胞系，而小峰则属于那个次要细胞系。值得注意的是，当发生两个或以上细胞混合的时候，检测结果看起来非常像细胞系的“遗传不稳定”——当一个细胞系存在亚群时，尤其是一些癌细胞系，由于遗传不稳定的存在，在一些位点的STR特性会不同。因此经验丰富的分子专家是非常重要的，他能够帮助分析复杂的电泳图谱（STR峰图），从而判断是否由于发生细胞系交叉污染而导致多等位基因情况。
如何根据
STR数据判断细胞系的身份？
收到细胞系鉴定结果以及
STR信息，可以与参考数据库进行比对。如果细胞样本的每个STR位点和参考细胞STR位点都能重合匹配，即说明该细胞系正确，反之则说明你的细胞系可能被错误标记，交叉污染或发生遗传不稳定。一般说来，匹配度≥80%即可认为该细胞系正确，匹配度＜80%则说明该细胞系的来源需要被怀疑。
提 示 :
如果细胞系被鉴定出发生交叉污染或错误标记，则需要拿更早代数的细胞进行鉴定，从而找到问题的起源或者直接从可靠的机构购买一株新的细胞系。
找寻抗体，试剂，细胞裂解液，试剂盒
酶联官方手机二维码