BJ5183-AD-1Chemically Competent Cell说明书产品货号: ML-G2098
保存条件: -80℃
产品规格: 10×100μl 50×100μl
产品介绍基 因 型endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr) [pAdEasy-1 (Ampr)]
简 要 说 明BJ5183-AD-1是携带了腺病毒质粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变,赋予BJ5183细胞较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)],赋予该菌株氨苄抗性,在病毒质粒构建时,只需转入线性化的目的质粒即可,简化了实验步骤,提高了病毒质粒重组概率。Strr赋予BJ5183-AD-1菌株链霉素抗性。MLBio-BJ5183-AD-1感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(size:1163bp)检测转化效率>1×105 cfu/μg DNA。操 作 说 明1.BJ5183-AD-1感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒(含有目标基因并线性化),并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。4.5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。注 意 事 项1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。2.混入目的DNA时应轻柔操作。3.BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后,可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁,纯化质粒。4.BJ5183-AD-1感受态细胞对温度敏感,应储存在-80℃超低温冰箱,避免温度波动,温度波动会降低感受态转化效率。
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