logo
微信公众号二维码

关注微信公众号

手机站二维码

前往手机站

订单查询
search-icon

产品分类

科研ELISA 科研人Elisa 科研大鼠Elisa 科研小鼠Elisa 科研仓鼠Elisa 科研兔Elisa 科研猪Elisa 科研其它Elisa 科研鱼Elisa 科研豚鼠Elisa 科研鸡Elisa 科研鸭Elisa 科研猴Elisa 科研牛羊马类Elisa 科研药物残留ELISA 科研植物Elisa
酶联产品
科研ELISA 科研人Elisa 科研大鼠Elisa 科研小鼠Elisa 科研兔Elisa 科研猪Elisa 科研鸡Elisa
广告
当前位置:首页 > 原代细胞 > 人原代细胞
人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)主图

人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)

prev next

  • 货 号:ml098340
  • 5×10⁵Cells/T25培养瓶
    规 格:
    ¥7880.00元
    价 格:
  • 快速询价     QQ:2881505708 免费咨询电话:021-54461587 / 021-54461730
    【友情提示】:产品价格与说明书请点击上面的链接,在线询价,索要说明书;
  • 重要提示:因产品不断更新,官网说明书如与纸质版有出入,请以纸质版为准! 购买前请务必让业务员单独给一份最新电子版说明书!
  • PDF下载

 
人外周血树突状细胞(成熟D C 细胞)

产品简介

产品名称 : 人外周血树突状细胞(成熟D C 细胞)

产品品牌 : 酶联生物

组织来源 : 外周血

产品规格 : 5×105cells/T 25细胞培养瓶

细胞简介

人外周血D C 细胞分离自外周血,由外周血单核细胞诱导而成的;外周血是除骨髓之外的血液,临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中,再在从血液中提取分离得到造血干细胞,我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞,在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞,典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长,在G M -C SF、IL4的作用下形成葡萄串样集落,细胞大而形态不规则,表面皱褶多,亦可见少量短刺状突,胞内细胞器丰富并可见吞噬泡,具有较强的迁移能力,伴随有部分未完全诱导成的单核细胞,贴壁形态多样。

而成熟的树突状细胞由未成熟D C 进一步经T N Fα、LPS等诱导而成,多数呈悬浮生长,细胞呈圆形,细胞体积进一步增大,表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 ),伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。未成熟D C 细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。D C 细胞尚无特异性细胞表面分子标志,主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。

其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(M H C )以及C D 80、C D 86等共刺激分子,进而激活T淋巴细胞,诱导免疫应答,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节;未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力,但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答,不能激活T细胞的第二信号,可导致T细胞无能,从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受。未成熟树突状细胞表面C D 80、C D 86、M H C -Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低,一般在30% 以下。

方法简介

酶联生物实验室分离的人外周血成熟D C 细胞采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来,细胞总量约为5×105cells/瓶 。

质量检测

酶联生物实验室分离的人外周血树突状细胞(成熟D C 细胞)经C D 86免疫荧光鉴定、细胞形态等综合鉴定,纯度可达80% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

培 养 基 : 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptom ycin等

换液频率 : 每2-3天换液一次

生长特性 : 半贴半悬浮

细胞形态 : 圆形,树突状

传代特性 : 属于高度分化细胞;属于不增殖细胞群

传代比例 : 不传代

消 化 液 : 0.25% 胰蛋白酶

培养条件 : 气相:空气,95% ;C O2,5%

人外周血树突状细胞(成熟D C 细胞)体外培养周期有限;建议使用酶联生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片

使用方法

人外周血树突状细胞(成熟D C 细胞)是一种半贴半悬浮细胞,细胞形态呈圆形,树突状,在酶联生物技术部标准操作流程下,细胞属于高度分化细胞;属于不增殖细胞群;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。

1.取出T 25细胞培养瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。

2. 半贴壁半悬浮细胞处理

1) 收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用吸管吸取PBS,吹洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;经1200-1500rpm 离心3min,弃上清,收集细胞沉淀①。

2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化。

3) 用吸管轻轻吹打混匀,收集细胞悬液至离心管中;经1200-1500rpm 离心3min,弃上清,收集细胞沉淀②。

4) 吸取5ml新鲜完全培养基,重悬细胞沉淀①、细胞沉淀②,把①、②混匀。

5) 用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞,按实验需求接种于实验器皿内,然后补充适量新鲜的完全培养基,置于37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

6) 待细胞状态稳定后,用于实验;可以每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。

3. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1m g/m l),明胶(0.1% ),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

注意事项

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和酶联生物技术部沟通。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。

用户评论(共6条评论)

  • 办事效率蛮高,几天,就帮我搞定了这个试剂盒,谢谢!
  • 盒子蛮不错,包含所需试剂,并提供了中英文双版说明书及增值税发票,很正规,销售人员的态度也谦和。
  • 灵敏度不错,重复性也行,试剂盒在我做的这些实验中,与国内同行的盒子相比来说,性价比挺高的,尤其是价格占有不错的优势,赞一个!
  • 操作挺方便的,也简单,当然,这也多亏了公司的技术人员详细的实验指导,很好,谢谢,实验也相当成功。
  • 实验出来的标准曲线很不错(很优美),而且价格相对合理,技术指导很到位......
  • 我购买了两盒,批次最新,保质期内,实验结果做出来了,货到的挺快,那么远,几天就到了,加上我做实验,一共五天就搞定了。
  • 经朋友介绍,购买了此公司的ELISA试剂盒,用过,还不错,实验效果很好,基本达到实验参数要求,如果,下次还做实验的话,我还买这家的,朋友这几年都在用这家的(长期订货)。

酶联生物经过不断的实验优化和改进,积累了大量的经验,拥有专业的酶联研发团队。利用专业的酶联免疫技术自主研发的elisa试剂盒,能对血清及其它样本定量检测抗原,定性检测特异性抗体。优质的试剂,先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。

ELISA检测技术服务内容:
1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。

以上代测费,凡购买本公司试剂盒,我们免费代测!
凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒,您只需将需要检测的动物(Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……)种类和检测指标(白介素类、激素类)及标本数量(48T/96T)通知公司业务员即可。在接到客户标本当日起,现货产品一周内将检测报告交到客户手中!
欢迎各科研单位在各种项目上与我们公司开展不同层次的密切合作,以双赢求发展,共同进步,为中国检测事业的发展积累经验。

二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请造模取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书,具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。

液体类标本:标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。

血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

血浆:应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

尿液、胸腹水、脑脊液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。

细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.0-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

三、寄标本时需注明以下情况:
1、标本编号;2、所测项目;3、是否做复孔;3、联系方式;4、实验后标本是否寄回。

客户须知:
客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

原代细胞培养 

组织块直接培养法

1.  取材,用 Hank's液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。

2.  用手术剪将组织剪切成 1mm3左右的小块,再用Hank's液洗三次。

3. 将组织块转移至培养瓶,并贴附于瓶底面。

4.  轻轻将培养瓶翻转,瓶底朝上,向瓶内注入适量的培养液,将培养瓶放置在 37℃恒温箱内培养。

5.  放置待组织小块贴附后,将培养瓶慢慢翻转平放,使组织浸入培养液中 37℃继续培养。

消化培养法

1.  取材,用 Hank's液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。

2.  用手术剪将组织剪切成 1mm3左右的小块,再用Hank's液洗三次。

3.  视组织块量加入酶液, 37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。

4.  加入 3—5ml培养液以终止酶消化作用(或加入相关酶抑制剂)。

5.  静置 5—10分钟,使未分散的组织块下沉,取悬液加入到离心管中。

6. 1000rpm,离心10分钟,弃上清液。

7.  加入 Hank's液5ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。

8.  加入培养液 1—2ml(视细胞量),血球计数板计数。

9.  将细胞转移到培养瓶中, 37℃下培养。

器官培养法

1.  将不锈网做成支架形状,调整其高度至培养皿的 1/2深度平面,在其表面放置0.5μm孔径滤膜。

2. 将培养液加入培养皿中,使液面刚刚接触到滤膜,但不要使其浮起。

3.  将要培养器官组织放在滤膜上,一般厚度不要超过 200μm,水平面积不超过10mm2。

4.  将上述准备好的培养物放入 CO2培养箱,并加注氧气调整氧分压,建议到90%。

5. 培养过程中要注意观察培养液平面,尽可能保持在与滤膜一致的水平上。

6.  上述可进行器官培养 1-3周,每2-3天换液一次,并根据情况做进一步实验和检测。

扫码添加客服