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细胞名称 : </strong> <a href="http://www.mlbio.cn"><span style="color: rgb(51, 153, 102);"><u><strong><span style="font-size: medium;">HEP-53.4 小鼠肝癌细胞</span></strong></u></span></a></div>
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<strong>细胞别名 : </strong>HEP-53.4 ; 53.4 ; 小鼠肝癌细胞</div>
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<div><strong>细胞来源 : </strong> 德国</div>
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<div><strong>细胞鉴定 : </strong> STR鉴定已通过</div>
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<div><strong>细胞形态 : </strong> 上皮样细胞,贴壁生长</div>
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<div><strong>培 养 基 : </strong> DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)(BasMed-AW-013)+FBS 10% + P/S1%</div>
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<div><strong>培养条件 : </strong>气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%</div>
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<div><strong>冻存条件 : </strong>无血清冻存液,液氮储存</div>
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<div><strong>细胞背景 : </strong>来源于 C57BL/6J小鼠的原发性肝细胞癌,这些小鼠肝细胞忠实地代表了肝细胞癌,并为研究这种类型的肝癌提供了有价值的模型,同义词HEP-53.4和53.4,它们便于识别和交叉引用,肝细胞癌是一个重大的健康问题,这些细胞能够对其分子通路、细胞相互作用和治疗策略进行精确研究,这些细胞起源于Mus musculus(小鼠),为理解和开发肝细胞癌的治疗方法提供了相关的模型系统。 </div>
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<div><strong>细胞用途 : </strong> 仅供科研使用</div>
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<div><strong>细胞货期 : </strong> 现货,1周左右</div>
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<div><strong>注意事项</strong><br />
<strong>1. </strong>常规消化收集细胞离心。 </div>
<div><strong>2. </strong>离心后去掉离心管内上清,加入1ml左右胰酶重悬细胞混匀,建议轻轻晃动或者轻轻吹打细胞, 放入培养箱消化细胞,再消化1min左右。 </div>
<div><strong>3. </strong>消化好后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,迅速加入3-5ml含血清的培养基混匀以终止消化,离心去除胰酶。 </div>
<div><strong>4. </strong>加入5ml左右的细胞相应的完全培养基混匀,按比例接入培养瓶/皿中。 </div>
<div><strong>5.</strong> 显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单细胞,若有少量成团的小细胞团可不用重新消化,使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。</div>
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<div><strong>常温发货</strong><br />
收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售,密度达标就可以传代。前期传代比例1:2,等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管,另外一瓶继续传代,反复冻存2-3只后才扩增做实验,以防突发情况引起断种。</div>
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<div><strong>干冰发货</strong><br />
常规细胞发货冻存管2只,复苏1只,另外一只备用,第一个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个,均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知我们。</div>
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<div><strong>贴壁细胞</strong><br />
<strong>1. </strong>弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。</div>
<div><strong>2.</strong> 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 <br />
<strong>3.</strong> 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。</div>
<div><strong>4. </strong>细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。<br />
<strong>5. </strong><strong> </strong>运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 </div>
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<div><strong>悬浮细胞</strong><br />
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×10⁵~1×10⁶个/mL(不同细胞对密度要求不同)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。</div>
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<div><strong>运输形式<br />
</strong>低温 :1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。</div>
<div>常温 <strong>: </strong><strong> </strong>T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。</div>
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<div><strong>生物安全</strong><br />
<strong>1. </strong>所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。</div>
<div><strong>2. </strong>建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。</div>
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<div><strong>特别注意</strong><br />
该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好,大部分的DMEM含有较高浓度的NaHCO3(3.7g/L),若使用DMEM(3.7g/L NaHCO3)培养基培养细胞时需要提高CO2浓度(7%-10%)。</div>
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用户评论(共6条评论)
酶联生物经过不断的实验优化和改进,积累了大量的经验,拥有专业的酶联研发团队。利用专业的酶联免疫技术自主研发的elisa试剂盒,能对血清及其它样本定量检测抗原,定性检测特异性抗体。优质的试剂,先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。
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二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请造模取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书,具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。
液体类标本:标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
血浆:应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.0-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
三、寄标本时需注明以下情况:
1、标本编号;2、所测项目;3、是否做复孔;3、联系方式;4、实验后标本是否寄回。
客户须知:
客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
贴壁培养与悬浮培养选哪个?
细胞培养的优势在于能够控制细胞繁殖的物理化学环境(
即温度、
pH值、渗透压、O2和CO2张力
)和生理环境(即激素和营养浓度
)。除温度外,培养环境由生长培养基控制。虽然细胞培养的生理环境不如其物理化学环境明确,但是通过更好地了解血清成分、确定增殖所需的生长因子以及更好地了解培养过程中的细胞微环境(即细胞间相互作用、气体扩散、细胞
-基质相互作用),现在
酶联生物可以采用无血清培养基进行一些细胞系的培养。
目前主要有两种基本的细胞培养体系
1. 一种是使细胞在人工基质上单层生长(贴壁培养)。
2. 一种是使细胞在培养基中自由漂浮生长(悬浮培养)。
贴壁培养
来自脊椎动物的大多数细胞,除了造血细胞系和少数其他细胞系,都是贴壁依赖性的,必须在经过专门处理以允许细胞粘附和扩散的合适基质上培养。
悬浮培养
但许多细胞系也可采用悬浮培养。大多数市售昆虫细胞系在单层或悬浮培养物中生长良好。悬浮培养细胞可在未经组织培养处理的培养瓶中培养,但随着培养物体积与表面积之比(通常为
0.2-0.5mL/cm2)的增加,阻碍了气体的充分交换,因此需要对培养基进行搅拌。这种搅拌
一般通过磁力搅拌器或者旋转瓶实现。
以下是贴壁培养与悬浮培养两种培养方式在适用类型,传代方式,采用酶法,细胞生长,培养方法,实验结果方面的详细对比。
贴壁培养
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悬浮培养
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需要使用经过组织培养处理的容器
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无需通过酶法或机械方法解离细胞
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细胞生长受到表面积限制 ,
从而可能限制细胞产量
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细胞生长受到培养基中细胞浓度的限制 ,
易于扩大规模培养
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包括原代细胞在内的大多数细胞类型
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适应悬浮培养的细胞和其他一些无粘附性的细胞(如造血细胞)
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需要定期传代 ,
但易于在倒置显微镜下进行目视检验
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较易传代但需要每天进行细胞计数和存活率测定
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可连续收获产物 ,
用于细胞学研究等多种研究应用
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可在未经组织培养处理的培养容器中进行培养 ,
需要搅动以便进行充分气体交换
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总 结 : 细胞的后续实验往往决定了细胞培养的形式和培养基,除了经过标准组织培养处理和未经处理的表面外,还使用了其他表面改良技术来获得预期的细胞培养结果。