人脉络膜微血管内皮细胞
产品简介：
产品名称 ：人脉络膜微血管内皮细胞
产品品牌 ：酶联生物
组织来源 ：脉络膜组织
产品规格 ：5×105cells/T 25细胞培养瓶
细胞简介：
人脉络膜微血管内皮细胞分离自眼球脉络膜组织。脉络膜在视网膜和巩膜之间，含有丰富血管和色素细胞，对外力冲击的耐受性较视网膜差，当眼球受到从前面来的外力的冲击作用通过玻璃体传到后极部时，坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用，使脉络膜在内外两种作用夹攻下而发生破裂和出血。脉络膜呈暗褐色，围绕视神经乳头部有照膜，为青绿色带金属光泽的三角形区。
脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜，由纤维组织、小血管和毛细血管组成，软而薄，棕红色，在巩膜和视网膜之间，续连于睫状体后方。脉络膜的血循环营养视网膜外层，其含有的丰富色素起遮光暗房作用。主要功能是营养视网膜外层及玻璃体，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同时对视觉系统起保护作用，对整个视觉神经有调节作用。续连于睫状体后方，含丰富的血管和色素细胞，有营养和遮光作用。
方法简介：
酶联生物实验室分离的人脉络膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶 。
质量检测：
酶联生物实验室分离的人脉络膜微血管内皮细胞经C D 31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息：
包被条件 ：PLL(0. 1m g/ml) ，明胶(0. 1%)
培 养 基 ：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptom ycin等
换液频率 ：每2-3天换液一次
生长特性 ：贴壁 细胞形态 内皮细胞样 传代特性 可传2-3代 传代比例 1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培养条件 ：气相 ：空气，95% 。C O2，5%
人脉络膜微血管内皮细胞体外培养周期有限。建议使用酶联生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养状态：
发货时发送细胞电子版照片
使用方法：
人脉络膜微血管内皮细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈内皮细胞样，在酶联生物技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代。建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
1. 取出T 25细胞培养瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min。倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化。
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5m L，置于37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1) 收集所有细胞悬液，1000rpm ，离心5min，保留沉淀。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min (或4℃冰箱静置5-7min) 。消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化。
3) 经1000rpm ，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1% FBS，促进贴壁) 重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热) 。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0. 1m g/m l），明胶（0. 1% ），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项：
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和酶联生物技术部沟通。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
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