基本信息
细胞品牌 : 酶联生物
种属来源 : 人
细胞编号 : ml-CC2032
组织来源 : 结肠
生长特性 : 贴壁生长
细胞形态 : 上皮细胞样
细胞代数 : 10代以内
细胞规格 : 1x10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
非常注意
1.细胞在传代和刚复苏时较为脆弱，中止液须为不含5-Fu的完全培养基，且在细胞未贴壁期间和贴壁前期需用不含5-Fu的完全培养基，待细胞生长状态稳定时再根据要浓度添加5-Fu。
2.若细胞生长状态较为缓慢时，可适当降低5-Fu的浓度，或使用不含5-Fu的完全培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的5-Fu浓度。
支原体检测 : 无
培养基 : L15 +10% FBS+PS（可添加5-Fu浓度为：400~1065uM）
培养条件 : 气相：100%空气（需用空气气相100%的培养箱）；温度：37℃
冻存条件 : 无血清冻存液，液氮储存
细胞货期 : 2周左右
发货方式 : 复苏发货（免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用）
供应范围 : 仅限于科研实验使用，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
特别说明 : 具体操作步骤以随货产品说明书为主
细胞培养操作
T25瓶
收货处理 : 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态
传代密度 : 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
传代比例 : 首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
传代方法 :
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
注意事项
1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。
冻存管
收货处理 : 收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏
传代密度 : 第二天换液并检查细胞密度
传代比例 : 一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶
传 代方法 : 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。
注意事项
1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存。
2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。
细胞冻存操作
冻存液配方 : 无血清冻存液，液氮储存
细胞密度 : 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例
冻存方法 :
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项
冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案
售后服务
细胞予重发
1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。
2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。
3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。
4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。
5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。
6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。
细胞不重发
1. 客户操作造成细胞污染，不重发。
2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。
3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。
4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。
5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。
6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。
特别说明
客户买细胞就找上海酶联生物，稳定传代，无污染，包存活，提供整体课题外包服务，光学成像，流式实验，电镜实验，动物实验，病理实验，分子生物学实验，细胞实验等，严格把控产品质量，所有细胞产品均有细胞鉴别、无菌检查、支原体检查，为科研人员提供可靠放心的产品。
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