基本信息
细胞品牌 : 酶联生物
种属来源 : 人
细胞编号 : ml-CC2051
组织来源 : 皮肤
生长特性 : 贴壁生长
细胞形态 : 上皮细胞样
细胞代数 : 10代以内
细胞规格 : 1x10⁶cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测 : 无
培 养 基 : RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBSNCI-H460/cis完全培养基
重要提醒 : 培养瓶中的培养基是不含药物的，待细胞状态良好，稳定生长时，可以用含加含40nM的吉西他滨药物培养基处理48h，期间若有部分细胞悬浮起来，属于正常情况，通过换液去掉即可。冻存时请不要在培养基中加药物。
培养条件 : 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
传代方法 : 1：2传代
冻存条件 : 无血清冻存液，液氮储存
发货方式 : 复苏发货（免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用）
供应范围 : 仅限于科研实验使用，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
特别说明 : 具体操作步骤以随货产品说明书为主
观察
1、收到细胞后，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养
瓶是否有破损或漏液等异常情况。
处理
1、75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。
2、显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40x,100x,200x各一张）前三天照片为重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。
3、不要打开培养瓶盖，将细胞放入37度培养箱中静置3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。
4、收到细胞后，及时查看说明书是贴壁细胞还是悬浮细胞形态，并按常规贴壁或悬浮细胞的传代方法操作。
贴壁
未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞
培养步骤。首次传代，建议1:2传代（两个T25）。（传代时建议一瓶用原瓶里面的完全培
养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，进行对比培养。）
特殊细胞注意事项
个别细胞贴壁不牢，在运输过程中发生细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清（后期对比培养使用），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加 5ml 完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml 完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。
注意：如收到密封培养瓶，处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松。
冻存细胞到货处理
1、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题，请即时联系。
2、将细胞取出转移至液氮或－80度冰箱保存，建议尽早复苏。
3、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。
特别说明：未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。
细胞复苏
1、 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2、将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种T25培养瓶，于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
细胞传代
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。
3、弃上清，沉淀细胞用1-2ml 完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。
细胞冻存
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5mi。
3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml/支的富衡无血清冻存液（FH7001），混匀后加入冻存管中。
（如：冻一支，加入1ml无血清冻存液）
4、 将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱
存放24小时以上。
售后服务
细胞予重发
1. 细胞运输中遭遇的各种问题，细胞丢失瓶身破损、培养液严重漏液等，重发。
2. 收到细胞未开封，如出现污染状况，重发。
3. 收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发。
4. 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏2天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发。
5. 常温发货的细胞静置22小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏2天后，出现污染，经核实后，重发。
6. 细胞活性问题，请在收到产品3天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发。
细胞不重发
1. 客户操作造成细胞污染，不重发。
2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发。
3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。
4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3天的细胞状态照片，不重发。
5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发。
6. 收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发。
特别说明
客户买细胞就找上海酶联生物，稳定传代，无污染，包存活，提供整体课题外包服务，光学成像，流式实验，电镜实验，动物实验，病理实验，分子生物学实验，细胞实验等，严格把控产品质量，所有细胞产品均有细胞鉴别、无菌检查、支原体检查，为科研人员提供可靠放心的产品。
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